Istologia Laboratori

 

ISTOLOGIA

Linee di ricerca

Nei laboratori di Istologia si svolge principalmente ricerca di base e pre-clinica, articolata in diverse linee di ricerca:

 

  1. Cellule staminali: nei nostri laboratori si svolgono studi in vitro su cellule staminali adulte isolate da diversi tessuti umani (cute, liquido amniotico, midollo osseo, periostio, dente, epitelio retinico pigmentato) di individui sani o affetti da selezionate patologie.  In particolare tali cellule vengono caratterizzate dal punto di vista morfologico e funzionale, viene valutata la loro biologia ed il potenziale differenziativo, la capacità di modulare il microambiente, nonché la loro interazione con altre popolazioni cellulari e con i biomateriali, al fine di promuovere un loro impiego nel campo della medicina rigenerativa. Inoltre le cellule staminali vengono isolate da tumori, al fine di identificare le “Cancer Stem Cells” ed eventuali nuovi marker per applicazioni diagnostiche e terapeutiche.

 

  1. Stress ossidativo e infertilità: il nostro gruppo si occupa di valutare il ruolo svolto dallo stress ossidativo nella patogenesi di varie patologie (ostetriche, neurologiche, endocrinologiche, etc.). In modo particolare si eseguono studi nell’ambito della prevenzione, diagnosi e cura dell'infertilità maschile, che causa una sofferenza psicologica e un disagio individuale e sociale pari o persino maggiori di quelli causati da altre patologie. Tale ricerca prevede l'isolamento degli spermatozoi da soggetti fertili e infertili e la valutazione delle loro caratteristiche morfologiche e funzionali, al fine di sviluppare tecniche di screening non invasive e terapie innovative.

 

  1. Studi di citotossicità: nei nostri laboratori si svolgono inoltre studi in vitro di citotossicità indotta da differenti agenti tossici, tra cui in particolare fibre minerali asbestiformi naturali e sintetiche, nonché prodotti di inertizzazione ad elevata temperatura di  composti cemento-amianto al fine di caratterizzarne e discriminarne il grado di tossicità correlato ai target microambientali (linee cellulari umane epiteliali alveolari, mesoteliali, monocito-macrofagiche).

 

 

Staff

I progetti di ricerca, coordinati dal Prof. Roberto Di Primio, sono svolti sotto la responsabilità delle Dott.sse Armanda Pugnaloni, Monica Mattioli Belmonte Cima, Eleonora Salvolini e Monia Orciani, coadiuvate dalle Dott.sse Guendalina Lucarini, Concetta Ferretti e Raffaella Lazzarini.

 

Spazi e strutture  

I laboratori, ubicati al III piano del Polo Eustachio della Facoltà di Medicina e Chirurgia, constano di ampi spazi di lavoro: una stanza per la preparazione dei campioni per la microscopia ottica ed elettronica, due per l’allestimento di colture cellulari, una per le analisi biochimiche e di biologia molecolare ed una per la citochimica e l’immunoistochimica. Sono anche disponibili 6 studi ed un’aula per la didattica teorico/pratica (ubicata al II piano del Polo Eustachio).

 

Sistemi sperimentali disponibili

Sono correntemente utilizzati sistemi in vitro di linee cellulari umane, oltre a colture primarie di cellule staminali isolate da diversi tessuti umani, sia sani che patologici e di cellule endoteliali di vena ombelicale e aorta umana. 

Sono impiegate metodiche sperimentali di microscopia elettronica a trasmissione ed a scansione, citochimica, immunoistochimica, biologia cellulare e molecolare, proteomica, biochimica e nanosistemi.

 

 

Strumentazione

  • Cappe a flusso laminare (Celbio, Gelaire e C.A.M. Bio)
  • Incubatori a CO2 (RSBiotech e New Brunswick)
  • Cell Counter  Countess™ (Invitrogen)
  • Sistema di colture in dinamica (Syntecon RCCS-4DQ)
  • Apparato per videomicroscopia time-lapse (NiKon Eclipse TS-videocamera, time-lapse recorder Panasonic AG-TL700)
  • Congelatore -80°C verticale (Premium U570, Eppendorf)
  • Real Time PCR (Mastercycler ep RealPlex 2S, Eppendorf)
  • Apparato per elettroforesi e Western blot (Invitrogen)
  • Lettore di micropiastre UV/Vis e spettrofotometro per cuvette (Thermo Scientific)
  • Spettrofotometro (Anthelie Secoman)
  • Centrifuga refrigerata (5810R con rotore basculante e adattatori Eppendorf)
  • Microcentrifuga refrigerata (5418R Eppendorf)
  • Centrifuga (Eppendorf 5410)
  • Citocentrifuga (Centra CL2 Thermo IEC)
  • Microtomi ed ultramicrotomi (Microm e Ultratome Nova LKB)
  • Microscopio a forza atomica (DualScopeTM C-21, DME)
  • Microscopio a contrasto di fase (Leica DM IL)
  • Fotomicroscopio a fluorescenza con analizzatore di immagini (Nikon Eclipse E600)
  • Microscopio elettronico a trasmissione (Philips CM 12)
  • Microscopi elettronici a scansione (Philips XL-20 e Zeiss Supra 40), completi di sistema di microanalisi EDAX

 

 

      

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English Version


 

HISTOLOGY

 

Research lines

The Histology group is mainly involved in basic and pre-clinical research, divided into several research lines:

 

  1. Stem cells: in our laboratories are performed in vitro studies on adult stem cells isolated from different human tissues (skin, amniotic fluid, bone marrow, periosteum, tooth, retinal pigmented epithelium) of healthy individuals or those with selected diseases.

In particular, these cells are characterized by a morphological and functional point of view, is evaluated their biology and differentiation potential, their ability to modulate the microenvironment, as well as their interaction with other cell population and biomaterials, to promote their use in the field of regenerative medicine.

Stem cells are also isolated from tumors, in order to identify the Cancer Stem Cells and any new markers for diagnostic and therapeutic applications.

  1. Oxidative stress and infertility: our group is focusing on the role of oxidative stress in the pathogenesis of various diseases (obstetrical, neurological, endocrinological). In particular, are performed studies concerning the prevention, diagnosis and treatment of male infertility, which causes psychological suffering, and individual and social discomfort equal or even greater than those caused by other diseases. This research involves the isolation of spermatozoa from fertile and infertile subjects, and the evaluation of their morphological and functional features, in order to develop non-invasive screening techniques and innovative therapies.

 

  1. Citotoxicity studies: in our laboratories are also carried out in vitro studies of cytotoxicity induced in particular by natural and synthetic asbestiform mineral fibers, and their inertization products in order to characterize and discriminate their degree of toxicity correlated with the microenvironmental targets (human alveolar epithelial, mesothelial, monocyte-macrophage cell lines).

 

 

 

Staff

Research Projects, coordinated by Prof. Roberto Di Primio, are carried out under the responsibility of Drs. Armanda Pugnaloni, Monica Mattioli Belmonte Cima, Eleonora Salvolini, and Monia Orciani, supported by Drs. Guendalina Lucarini, Concetta Ferretti, and Raffaella Lazzarini.

 

Lab spaces

The Lab, located at the Eustachio building of the School of Medicine, 3rd floor, consists of wide work areas: one room dedicated to sample preparation for light and electron microscopy, two to the preparation of cell cultures, one to biochemistry and molecular biology and one to cytochemistry and immunohistochemistry. Six office rooms and a room for theoretical/practical teaching (Eustachio building, 2nd floor) are also available.

 

Experimental systems

In vitro systems of human cell lines,  as well as primary cultures of stem cells isolated from different human tissues (healthy and pathological), and endothelial cells (from human umbilical vein and aorta) are currently used.

Experimental methods of transmission and scanning electron microscopy, cytochemistry, immunohistochemistry, molecular and cell biology, proteomics, biochemistry and nanosystems are routinely employed.

 

Instrumentation

  • Laminar flow hoods  (Celbio, Gelaire, and C.A.M. Bio)
  • COincubators  (RSBiotech, and New Brunwsick)
  • Cell Counter  Countess™ (Invitrogen)
  • Dynamic cell culture system (Syntecon RCCS-4DQ)
  • Time−lapse videomicroscopy equipment  (Nikon Eclipse TS-videocamera, time-lapse recorder Panasonic AG-TL700)
  • -80°C  freezer (Premium U570, Eppendorf)
  • Real Time PCR (Mastercycler ep RealPlex 2S, Eppendorf)
  • Electrophoresis and Western Blot apparatus  (Invitrogen)
  • UV/Vis Multiwell plate reader and spectrophotometer (Thermo Scientific)
  • Spectrophotometer (Anthelie Secoman)
  • Refrigerated centrifuge (5810R with tilt rotor and adapters, Eppendorf)
  • Refrigerated microcentrifuge  (5418R Eppendorf)
  • Centrifuge (Eppendorf 5410)
  • Cytocentrifuge (Centra CL2 Thermo IEC)
  • Microtomes and ultramicrotomes (Microm and Ultratome Nova LKB)
  • Atomic force microscope (DualScopeTM C-21, DME)
  • Phase-contrast microscope (Leica DM IL)
  • Fluorescence microscope equipped with digital camera and image analyzer (Nikon Eclipse E600)
  • Transmission electron microscope (Philips CM 12)
  • Scanning electron microscopes (Philips XL-20 and Zeiss Supra 40), equipped with EDAX microanalysis system.